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                      支原體PCR絕對定量標準品的說明及復溶操作

                      更新時間:2022-10-19  |  點擊率:497
                        支原體PCR絕對定量標準品對支原體PCR或qPCR方法進行驗證,除了可參考試劑盒生產(chǎn)廠家自身的驗證外(盡管它不能*替代用戶自己的驗證,但可提供特異性驗證的一些信息,如使用哺乳動物細胞DNA、某些細菌菌屬DNA等,而不必使用者自己再去嘗試),用戶自己主要是對方法的檢測限和耐用性進行驗證,這里常用的就是10CFU支原體標準品。100CFU標準品可作為一個補充。
                        支原體PCR絕對定量標準品的說明:
                        1.定量標準品dna包括支原體基因組dna和細菌基因組dna,用于梯度稀釋后,qpcr標準曲線的繪制。
                        2.支原體基因組dna用于支原體核酸擴增檢測的方法學驗證,包括確定支原體qpcr方法的檢測限。
                        3.細菌定量標準品dna用于qpcr檢測水中細菌的精確定量。
                        復溶操作:
                        1.標準品短時離心,以收集凍干粉至管底。
                        2.取試劑盒提供的tris緩沖液(白蓋)100µl,加入到標準品管內(nèi)(綠蓋)。
                        3.室溫下靜置5分鐘。
                        4.渦旋混合10秒鐘,離心5秒鐘。
                        5.選合適體積的復溶dna用于pcr擴增或梯度稀釋,以制備標準曲線。
                        支原體PCR絕對定量標準品每批支原體都會提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值,以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下,但無法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標定的基因組DNA標準品則可進一步確定檢測限的數(shù)值。而且核酸法最終檢測的對象是核酸,而產(chǎn)品的QC主要關(guān)注的是支原體,核酸的存在是側(cè)面反映支原體存在的一個指標。CFU與基因拷貝數(shù)的比值很好地對二者進行了關(guān)聯(lián)。
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