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                      教你一招:細胞被支原體污染后的處理辦法

                      更新時間:2022-07-14  |  點擊率:744

                      細胞被支原體污染,解決方案

                      方法一:確認細胞已被支原體污染,終止試驗,丟棄所有被污染的細胞和耗材。

                      重新復蘇細胞,注意選用未被污染的細胞株、血清和培養(yǎng)基,并規(guī)范操作。

                      方法二:對于珍貴的,樣品不可再得的細胞,或價格昂貴的種子細胞,不但無法丟棄,而且作為種子細胞,還需要*祛除支原體污染。

                      此時,需選用特異性的支原體殺除劑,清除污染,保護細胞。


                      Mynox®。試劑可在2-3小時內將支原體主動殺除。特別適合細胞保種。

                      Mynox®為枯草桿菌中提取出的生物制劑,加入培養(yǎng)液中,可特異性地與支原體膜結合,改變膜通透性。通過此生物物理的方法,2~3小時內,即可把細胞中的支原體殺除掉。因為細胞膜結構與支原體膜不同,故Mynox®不會與細胞膜結合,因此無細胞毒性。

                      注意:3小時后,需將此試劑洗脫,將細胞更換到新的培養(yǎng)耗材和培養(yǎng)液中,重新培養(yǎng)。

                      此時,不應使用PCR方法檢測細胞中支原體。由于支原體解體,故PCR結果為假性強陽性。

                      Mynox®殺除支原體功能強大有效,但價格較貴。

                      方法三:對于已耗費很多時間,大量擴增起來的細胞,或經(jīng)過基因轉染、體外刺激等大量工作處理過的細胞,如果發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染了,怎么辦?此時由于前期工作量巨大,使操作人員無法丟棄已有細胞。

                      但由于價格原因,又無法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細胞上的支原體,

                      同時,實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染,讓實驗得以往下推進,以最終獲得準確的實驗數(shù)據(jù)。

                      此時,實驗者可選用對支原體很好的抑制劑,通過對細胞的前期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養(yǎng),得以將支原體污染*清除,確保試驗順利推進,結果準確。

                      世界此類試劑眾多,筆者周圍的實驗人做過很多嘗試,其中效果最確切且性價比較高的當屬德國Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

                      它的原理是:通過抑制支原體增殖中DNA和蛋白的合成,達到抑制新的支原體增殖的目的。屬復合型的新型抗生素。

                      注:使用ZellShield®時,不需使用鏈青霉素。


                      操作步驟:

                      第一步:研究發(fā)現(xiàn),98%的支原體污染發(fā)生在細胞間隙。因此,首先要把細胞消化下來,放入離心管,懸浮沖洗,離心,棄上清,反復三次。此時可將細胞上大部分的支原體去除,為進一步加藥抑制做好準備。

                      第二步:培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®,細胞進行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制,舊的支原體隨著細胞的換液逐步減少,通過4代左右的培養(yǎng),細胞中的支原體基本可被*清除。


                      有些細胞保種中心,當珍貴細胞被支原體污染后,會將Mynox®和ZellShield®結合使用,效果確切,結果令人滿意。


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