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                      胚胎干細胞培養(yǎng)中的常見添加劑

                      更新時間:2022-06-17  |  點擊率:626

                      干細胞培養(yǎng)

                      胚胎干細胞(Embryonic stem cell,ESCs,簡稱ES、EK或ESC細胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來的一類細胞,它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。

                      無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,ES細胞都能被誘導分化為機體幾乎所有的細胞類型。胚胎干細胞體外培養(yǎng)的原則是:促進自身的同時,維持其未分化二倍體狀態(tài)。

                      細胞培養(yǎng)離不開培養(yǎng)基的參與,胚胎干細胞的培養(yǎng)也不例外。在該過程中,往往需要添加一些額外成分,輔助干細胞的生長發(fā)育。

                      胚胎干細胞目前有兩種主流培養(yǎng)方法:有飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法。

                      無論哪種方法,都需要用到一些化學試劑、細胞因子這些成分有何作用?今天我們就來一探究竟。


                      絲lie霉素-C

                      對于有飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,在制作“飼養(yǎng)單層"時,需要用絲lie霉素-C處理MEF細胞或STO細胞。其作用是使細胞停止分裂(滅活),但不至于失活,還能夠分泌細胞因子,有利于后期干細胞生長。


                      明膠/基質(zhì)膠

                      細胞與基底膜間的相互作用是調(diào)控細胞行為的重要因素之一。基質(zhì)膠可認為是一種可溶性的基底膜基質(zhì)。另外,有實驗表明,這類凝膠狀物質(zhì)能夠為干細胞提供一定的支撐力。

                      因此在對“滅活"過的MEF細胞或STO細胞進行鋪板前,需要用明膠/基質(zhì)膠包被培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿。


                      白血病抑制因子(LIF)

                      白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory Factor,LIF),是一種具有多種功能的細胞因子,但其最重要的應用是維持胚胎干細胞的未分化狀態(tài)。

                      也有實驗表明,BRL條件培養(yǎng)基或者大鼠心肌細胞條件培養(yǎng)基,也有類似于LIF的功能。


                      β-巰基乙醇

                      β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時,可適當增加巰基乙醇的比例 (不超過標準量的1.5倍)。


                      HEPES

                      HEPES(4-羥yi基pai嗪乙磺酸)是一種常用的兩性離子緩沖液,其緩沖范圍恰好在pH6.8-8.2,符合細胞生長環(huán)境,可以為細胞生長提供充足的緩沖體系。


                      L- 谷氨酰胺

                      L- 谷氨酰胺是幾乎所有哺乳動物和昆蟲細胞在培養(yǎng)過程中所必需的氨基酸。它是許多細胞培養(yǎng)基的重要組成部分,參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,是細胞培養(yǎng)的主要能量來源。

                      一般情況下,培養(yǎng)基中是含有L-谷氨酰胺的,如果所購的培養(yǎng)基不含,則需另外添加。其他非必需氨基酸(NEAA)同理。


                      丙酮酸鈉

                      除了葡萄糖以外,丙酮酸鈉通常還作為碳來源添加到細胞培養(yǎng)基中。由于細胞在糖酵解途徑中將丙酮酸鈉作為中間代謝物,因此它不是所有細胞培養(yǎng)所需要的添加劑。

                      然而,如果細胞在補充了丙酮酸鈉的培養(yǎng)基中生長,繼續(xù)使用該添加劑,能有效避免細胞生長可能會變緩的狀況。需要注意的是,如果培養(yǎng)基中本身就有丙酮酸鈉,則無需添加。

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