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                      當前位置:首頁  >  技術文章  >  細胞死亡及生長異常

                      細胞死亡及生長異常

                      更新時間:2022-02-28  |  點擊率:768

                      1、首先講一下細胞生長緩慢的原因:

                      a)更換了血清或者培養(yǎng)基,細胞需要一段時間適應一下;

                      b)由于細胞的特殊種類,培養(yǎng)基中缺少某些生長因子;

                      c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細菌污染;

                      d)傳代的時候細胞密度過低;

                      e)細胞狀態(tài)老化;

                      f)支原體污染。

                      2、解決上述問題的方法:

                      a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養(yǎng)基,可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細胞慢慢適應。

                      b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染,可以先不加抗生素,觀察細胞狀態(tài)。

                      c)增加細胞的接種密度。

                      d)發(fā)現細胞老化的時候,及時更換新的細胞。

                      e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿,及時清潔消毒孵箱。

                      3、造成細胞死亡的原因:

                      a)細胞消化過度;

                      b)沒有及時換液,營養(yǎng)成分消耗殆盡;

                      c)如果前一天細胞的狀態(tài)很好,換液之后就全死了,應該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題。

                      4、如何判定細胞是否發(fā)生支原體污染:可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當細胞發(fā)生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發(fā)現污染時立刻棄掉,重新培養(yǎng)。

                      5、如果孵箱中只是某種細胞持續(xù)性大量死亡,而其他細胞狀態(tài)都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌,遇到這種情況,小六兒也不知道該怎么做,只能是先停一段時間看看。。。。。。

                      6、其他注意事項:每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴重,建議不要使用。

                      科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。

                      Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經過嚴格質控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產日期,保質期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

                      實驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物"網站,留言技術部,得到免費幫助。)


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