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                      當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

                      如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

                      更新時間:2022-01-14  |  點擊率:560

                      胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

                      組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。


                      科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。


                      血清沉淀是什么?
                      血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀,其成分有多種類型,產(chǎn)生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。

                      1. 纖維蛋白(Fibrin)
                      血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中,血清采集、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集,形成肉眼可見的沉淀。

                      2. 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
                      這是一種常見的沉淀成分,通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時,這種現(xiàn)象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動,常被誤認為是微生物污染。
                      3. 其他成分(Other) 
                      血清中的其他成分也會形成沉淀,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

                      解凍血清時 ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

                      按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

                      (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

                      (2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

                      (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

                      (4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。

                      (5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

                      (6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。


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