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                      新發(fā)現(xiàn):RNA可變剪接在造血干細胞發(fā)生中的作用

                      更新時間:2022-01-13  |  點擊率:623

                      RNA剪接(RNA splicing)是指從DNA模板鏈轉錄出的最初轉錄產(chǎn)物中除去內(nèi)含子,并將外顯子連接起來形成一個連續(xù)的RNA分子的過程。

                      RNA剪接機制的研究 ,是80年代生物化學和分子生物學領域中最有生機的研究課題之一,它不僅解決不連續(xù)基因轉錄產(chǎn)物的剪接問題,而且對于了解不連續(xù)基因的起源乃至整個生命起源與進化問題都是有力的推動。

                      另外,核酸分子的催化功能的發(fā)現(xiàn)拓寬了人們對于酶的認識。

                      造血干細胞發(fā)生過程中的RNA可變剪接

                      近日,發(fā)表在《Science Advances》上的一篇名為:“Single-cell architecture and functional requirement of alternative splicing during hematopoietic stem cell formation”的文章,揭示了造血干細胞發(fā)生過程中的RNA可變剪接。

                      第一個造血干細胞(HSCs)產(chǎn)生于哺乳動物胚胎發(fā)育期間的主動脈-性腺-中腎(AGM)區(qū)域。血統(tǒng)追蹤和實時體內(nèi)觀察表明,造血干細胞來自于造血內(nèi)皮細胞(HECs),這是一種沿背主動脈腹壁的短暫群體。

                      最近,這些細胞被分離出來,并以單細胞轉錄組學為基礎,繪制了小鼠HSC發(fā)育全程的RNA剪接圖譜,并對內(nèi)皮細胞向造血細胞的轉變(EHT)過程中,出現(xiàn)的關鍵可變剪接(alternative splicing, AS)及其上游調(diào)控因素進行探究,鑒定出Srsf2因子——通過調(diào)控造血細胞特異性AS事件促進HSC發(fā)生的新機制。

                      結果1

                      從AS角度解析T1 pre-HSC所呈現(xiàn)的尤為顯著的轉錄本多樣性:

                      • AS頻率在T1 pre-HSC時期到達dian峰,與顯著的轉錄本多樣性一致。

                      結果2

                      EHT期間轉錄異構體豐度的功能相關差異:

                      • 84%的HEC和73%的T1 pre-HSC特征亞型(signature isoforms)是蛋白質編碼轉錄本,負責各種RNA代謝過程相關功能。

                      結果3

                      一系列AS事件介導了EHT中的轉錄多樣性:

                      • 與AECs相比,“剪接體”途徑的基因表達在HEC中更為豐富。

                      結果4

                      血源特異性包括AS事件是可在體內(nèi)檢測到的,是體外造血細胞生成所必需的。

                      結果5

                      Srsf2在內(nèi)皮階段的缺失會破壞EHT。

                      結果6

                      Srsf2協(xié)調(diào)造血特異性AS事件:

                      • Srsf2通過調(diào)節(jié)EHT過程中關鍵基因的剪接模式,從而在HSC發(fā)生中發(fā)揮作用。

                      這項研究中,用到了RNA FISH、qPCR等高精度分子實驗,這些實驗比較容易收到外源DNA、RNA的干擾,因此,為了保證實驗的準確性,如何祛除外源干擾,十分關鍵。

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                      能夠有效清除DNA或RNA污染:

                      • 1分鐘起效;

                      • 保護實驗人員與實驗材料,避免接觸DNA污染;

                      • 非堿性,無致癌性,成分安全。

                      PCR Clean™噴霧劑使用方法:

                      1. 將PCR Clean™噴在操作臺表面,反應1分鐘后,即可用干凈紙巾擦干試劑。注意:如果沒有擦拭干凈,液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留,影響美觀。此時可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處,然后擦拭即可。

                      2. 對于移液器要祛除DNA/RNA污染時,請按照說明書拆開移液器,將移液器桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中, 1分鐘后取出后用水沖洗,晾干,重新組合。

                      3. 將PCR Clean™桶裝,可用于補充到噴霧劑瓶中,或用于潔凈間地板等大面積清除DNA/RNA污染。

                       

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